SEM扫描电镜样品制备技术分享

扫描电镜样品制备技术是获取高质量SEM扫描电镜图像和分析结果的关键步骤。以下是对扫描电镜样品制备技术的详细分享：

一、SEM扫描电镜样品制备的基本要求

保持完好的组织和细胞形态：对于生物样品，需要确保其结构和形态在制备过程中不受破坏。

充分暴露要观察的部位：通过适当的处理，使需要观察的部位清晰可见。

良好的导电性：扫描电镜样品需要具备良好的导电性，以避免电荷积累导致的图像畸变。对于非导电样品，需要进行导电处理，如喷镀金属膜。

较高的二次电子产额：适当提高样品表面的二次电子发射率有助于提高成像质量。

保持充分干燥的状态：残留水分会加速电子枪阴极材料的挥发，并散射电子束导致分辨率下降。

二、SEM扫描电镜样品制备的常用方法

块状样品制备方法

小块样品：可直接固定在碳导电胶带上。

块体较大或需要高分辨观测的样品：可采用碳/银导电浆液进行固定，或在碳导电胶带固定后再在其四周刷上碳胶或银胶。为确保固定牢靠，可在其表面固定两条胶带连接到样品台上，以增强导电与固定的作用。

粉末样品制备方法

常规粉体：可用牙签挑起后弹在导电胶带上，然后用洗耳球或压缩空气等吹掉浮粉。若感觉量少或需要做能谱分析，可重复多次上述步骤。

较大粉体、不导电粉体或磁性粉体：可将液态的碳胶或银胶刷在样品台上，在未干之前利用牙签挑起粉体弹在其上，然后用洗耳球或压缩空气等吹掉浮粉。

小颗粒粉体、易团聚粉体或需要进行颗粒度统计的粉体：需先利用稀释溶液对粉体进行稀释超声分散后才可进行观测。具体步骤包括稀释、超声分散、取样、滴样和烘干等。

生物样品制备方法（以微生物为例）

取样：根据样品类型，用适当的方法取样，如用无菌剪刀从阳极上剪下一块电极生物膜样品。

固定：用适当的固定剂（如戊二醛）对样品进行固定，以保存其结构和形态。固定时间和条件需根据样品类型进行调整。

冲洗：用适当的缓冲溶液（如磷酸缓冲溶液）对样品进行冲洗，以去除固定剂残留。

脱水：用乙醇等脱水剂对样品进行脱水处理，以去除水分。脱水过程中需逐渐提高乙醇浓度，以避免样品变形。

置换：用适当的置换剂（如乙酸异戊酯）置换脱水剂，为干燥做准备。

干燥：采用临界点干燥法等方法对样品进行干燥处理，以避免样品在干燥过程中变形。

粘样：用导电胶布等将样品粘贴在扫描电镜样品台上。

喷金：用离子溅射镀膜仪等设备在样品表面镀上一层金属膜（如金膜），以提高样品的导电性和二次电子产额。

三、扫描电镜样品制备的注意事项

避免污染：样品中不能存在挥发物、污染物等，否则将污染真空系统并影响成像质量。

防止损伤：在制备和观察过程中，需避免对样品造成不必要的损伤，如机械损伤、热损伤等。

控制镀膜厚度：镀膜厚度对成像质量有重要影响。过厚会掩盖样品细微结构，过薄则无法起到导电作用。通常镀层厚度控制在1~10纳米较为合适。

选择合适的制备方法：不同类型的样品在形态和性质上存在巨大差异，需根据样品类型选择合适的制备方法。

综上所述，SEM扫描电镜样品制备技术是一项复杂而精细的工作，需要根据样品类型和需求选择合适的制备方法，并严格控制制备过程中的各个环节，以确保获得高质量的扫描电镜图像和分析结果。